L’açido propiònico (PPA), un agente antifongico e additivo dietetico commun, o l’à demostrou de provocâ un neurosviluppo anormale inte di ratti accompagnou da unna disfonçion gastrointestinale, ch’a peu vegnî provocâ da-a disbioxi intestinale. L’é stæto suggerio un ligammo tra l’espoxiçion a-o PPA inta dieta e a disbioxi do microbiota intestinale, ma o no l’é stæto studiou direttamente. Chì emmo studiou i cangi assoçiæ a-o PPA inta compoxiçion do microbiota intestinale che peuan portâ a-a disbioxi. I microbiömi de l’intestin de ratti alimentæ con unna dieta no trattâ (n=9) e unna dieta inricchia con PPA (n=13) en stæti sequensiæ pe mezo de un sequensiamento metagenòmico à longa portâ pe valuâ e differense inta compoxiçion micròbica e inti percorsci metabòlichi battëi. O PPA dietetico o l’ea assoçiou à un aumento de l’abbondansa de taxa scignificativi, compreiso diverse speçie de bacteròidi, prevotella e ruminococcus, di quæ membri en stæti ligæ a-a produçion de PPA in preçedensa. I microbiömi de ratti espòsti à PPA aivan ascì ciù percorsci ligæ a-o metabolismo di lipidi e a-a bioscintexi di ormoin steròidi. I nòstri resultati indican che o PPA o peu alterâ o microbiota de l’intestin e i seu percorsci metabòlichi assoçiæ. Sti cangi stæti osservæ mettan in luxe che i conservanti clascificæ comme segui pe-o consummo peuan influensâ a compoxiçion do microbiota de l’intestin e, à seu vòtta, a sanitæ de l’òmmo. Tra de questi, P, G ò S vëgnan seleçionæ à segonda do livello de clascificaçion ch’o vëgne analizzou. Pe redue a-o minimo l'impatto de clascificaçioin fäse poxitive, l'é stæto adottou un livello minimo d'abbondansa relativa de 1e-4 (1/10.000 lettue). Avanti de l’analixi statistica, e abbondanse relative reportæ da-o Bracken (fraçion_totale_lettue) en stæte trasformæ pe mezo da trasformaçion do rappòrto log çentrou (CLR) (Aitchison, 1982). O metodo CLR o l'é stæto çernuo pe-a trasformaçion di dæti perché o l'é invariante in sciâ scâ e o basta pe di insemmi de dæti no ræi (Gloor et al., 2017). A trasformaçion CLR a deuvia o logaritmo naturale. I dæti de conteggio reportæ da-o Bracken son stæti normalizzæ deuviando l'esprescion de registro relativo (RLE) (Anders e Huber, 2010). E figue en stæte generæ pe mezo de unna combinaçion de logaritmi matplotlib v. 3.7.1, nasciui in mâ v. 3.7.2 e logaritmi sequensiali (Gloor et al., 2017). 0,12,2 e stantanotaçioin v. 0,5,0 (Hunter, 2007; Waskom, 2021; Charlier e atri, 2022). O rappòrto baçillo/batteroide o l'é stæto carcolou pe ògni campion deuviando di conti battëi normalizzæ. I valoî reportæ inte tabelle vëgnan arrotondæ à 4 çiffre deximæ. L'indiçe de diverscitæ do Simpson o l'é stæto carcolou pe mezo do script alpha_diverscitæ.py fornio into pacchetto KrakenTools v. 1.2 (Lu et al., 2022). O rappòrto de Bracken o l’é fornio into script e l’indiçe de Simpson «Si» o l’é fornio pe-o parametro -an. E differense scignificative inte l'abbondansa son stæte definie comme differense medie de CLR ≥ 1 ò ≤ -1. Unna differensa media de CLR de ±1 a l'indica un aumento de 2,7 vòtte de l'abbondansa de un tipo de campion. O segno (+/-) o l'indica se o taxon o l'é ciù abbondante into campion PPA e into campion de contròllo rispettivamente. O scignificato o l'é stæto determinou pe mezo do test U do Mann-Whitney (Virtanen e atri, 2020). L'é stæto addeuviou di modelli de statistiche v. 0,14 (Benjamini e Hochberg, 1995; Seabold e Perktold, 2010) e l'é stæto applicou a proçedua Benjamini-Hochberg pe correze pe ciù verifiche. Un valô de p regolou ≤ 0,05 o l'é stæto addeuviou comme livello pe determinâ o scignificato statistico.
O microbiòma uman o l'é de spesso indicou comme “l'urtimo òrgano do còrpo” e o zeuga un ròllo fondamentale inta sanitæ umaña (Baquero e Nombela, 2012). Ciù into dettaggio, o microbiöma de l’intestin o l’é reconosciuo pe-a seu influensa e o seu ròllo inte tutto o scistema inte tante fonçioin essençiale. I battëi commensali en abbondanti inte l’intestin, òccupan diversci nisci ecològichi, deuvian i nutrienti e competan co-i agenti patògeni potensiali (Jandhyala et al., 2015). Diversci componenti battëi do microbiòta de l’intestin en boin à produe di nutrienti essençiali comme e vitamine e à promeuve a digestion (Rowland et al., 2018). L’é stæto demostrou ascì che i metabòliti battëi influensan o sviluppo di tesciui e megioan i percorsci metabòlichi e immunitäi (Heijtz et al., 2011; Yu et al., 2022). A compoxiçion do microbiöma de l’intestin de l’òmmo a l’é estremamente diversa e a depende da di fattoî genetichi e ambientali comme a dieta, o genere, e mëxiñe e o stato de sanitæ (Kumbhare et al., 2019).
A dieta materna a l’é unna componente fondamentale do sviluppo do feto e do neonato e unna vivagna putativa de compòsti che peuan influensâ o sviluppo (Bazer et al., 2004; Innis, 2014). Un de sti compòsti d’interesse o l’é l’açido propiònico (PPA), un sottoproduto d’açidi grasci à cadeña curta ottegnuo da-a fermentaçion battëia e un additivo alimentare (den Besten et al., 2013). O PPA o l’à de propietæ antibattëie e antifongiche e donca o ven deuviou comme conservante alimentare e inte applicaçioin inte l’industria pe inibî a crescita de moggio e battëi (Wemmenhove et al., 2016). O PPA o l’à di effetti despægi inte di tesciui despægi. Into figæto, o PPA o l’à di effetti antinfiammatöi influensando l’esprescion de citochine inti macrofaghi (Kawasoe et al., 2022). St’effetto regolatô o l’é stæto osservou ascì inte de atre çellole immunitäie, ch’o pòrta à unna sottoregolaçion de l’inflamaçion (Haase et al., 2021). À tutti i mòddi, l’effetto oppòsto o l’é stæto osservou into çervello. Di studdi passæ an mostrou che l'espoxiçion a-o PPA a l'induxe un comportamento ch'o s'assomeggia à l'autismo inti ratti (El-Ansary et al., 2012). Di atri studdi an demostrou che a PPA a peu indue a gliose e attivâ di percorsci proinfiammatöi into çervello (Abdelli et al., 2019). Dæto che o PPA o l’é un açido debole, o peu diffondese atraverso de l’epitelio intestinale into strixello sanguigno e donca attraversâ de barriere restrittive, compreiso a barriera sangue-çerebro e a plaçenta (Stinson et al., 2019), mettendo in luxe l’importansa do PPA comme metabolito regolatô produto da-i battëi. Sciben che o ròllo potençiale da PPA comme fattô de reisego pe l’autismo o l’é in fase de reçerca, i seu effetti in scî individui con autismo peuan anâ a-o de là de l’induçion da differençiaçion neurale.
I scintomi gastrointestinali comme a diarrea e o constipaçion en frequenti inte di paçienti con di desturbi do neurosviluppo (Cao et al., 2021). Di studdi preçedenti an mostrou che o microbiòma di paçienti con di desturbi do spettro autista (ASD) o l’é despægio da quello di individui sani, cösa ch’a suggerisce a presensa de disbiòxi do microbiòta intestinale (Finegold et al., 2010). Do mæximo, e caratteristiche do microbiòma di paçienti con de mouttie d’inflamaçion de l’intestin, obesitæ, mouttia d’Alzheimer, etc. À tutti i mòddi, fin à ancheu no l’é stæto stabilio nisciuña relaçion de caxon tra o microbiòma de l’intestin e e mouttie ò i scintomi neurològichi (Yap et al., 2021), sciben che se pensa che diverse speçie battëie zeugan un ròllo inte çertidun de sti stati de mouttia. Pe dâ un exempio, l’Akkermansia, i Battròidi, i Clostridium, i Lattobaçilli, i Desulfovibrio e di atri generi en ciù abbondanti into microbiòta di paçienti con autismo (Tomova et al., 2015; Golubeva et al., 2017; Cristiano et al., 2018; Zurita et al. Comme da nottâ, se sa che e speçie membre de çertidun de sti generi an di geni assoçiæ a-a produçion de PPA (Reichardt et al., 2014; Yun e Lee, 2016; Zhang et al., 2019; Baur e Dürre, 2023). Dæto e propietæ antimicròbiche do PPA, l’aumento da seu abbondansa o peu ëse benefico pe-a crescita di battëi produttoî de PPA (Jacobson et al., 2018). Donca, un ambiente ricco de PFA o peu portâ à di cangi into microbiota de l’intestin, compreiso i patògeni gastrointestinali, che peuan ëse di fattoî potensiali che pòrtan à di scintomi gastrointestinali.
Unna domanda primmäia inta reçerca in sciô microbiòma a l’é se e differense inta compoxiçion micròbica seggian unna causa ò un scintoma de mouttie de sotta. O primmo passo verso l’ascciæimento da relaçion complessa tra a dieta, o microbiòma de l’intestin e e mouttie neurològiche o l’é de valuâ i effetti da dieta in sciâ compoxiçion micròbica. Pe sta finalitæ emmo deuviou o sequensiamento metagenòmico lezzuo pe longa pe confrontâ i microbiömi de l’intestin di figgi de ratti alimentæ con unna dieta ricca ò pöca de PPA. I figgi vegnivan alimentæ co-a mæxima dieta che e seu moæ. Noemme l’emmo fæto l’ipòtexi che unna dieta ricca de PPA a portieiva à di cangi inta compoxiçion micròbica de l’intestin e inti percorsci fonçionali micròbichi, mascime quelli ligæ a-o metabolismo de PPA e/ò a-a produçion de PPA.
Sto studio o l’à deuviou di ratti trasgenichi FVB/N-Tg(GFAP-GFP)14Mes/J (Jackson Laboratories) che sovraespriman unna proteiña fluorescente verde (GFP) sotta o contròllo do promotô GFAP speçifico pe-a glia segondo e linie guidda do Comitato pe-a cura e l’utilizzaçion de bestie instituçionale da Florida çentrale. PROTO20200002). Dòppo o desmette, i ratti vegnivan allögiæ de pe loiatri inte de gaggie con 1-5 ratti de ògni sesso pe gaggia. I ratti vegnivan alimentæ ad libitum con unna dieta de contròllo purificâ (dieta standard modificâ à etichetta averta, 16 kcal% de grasci) ò con unna dieta supplementâ con propionato de sòdio (dieta standard à etichetta averta modificâ, 16 kcal% de grasci, ch’a contegniva 5.000 ppm de propionato de sòdio). A quantitæ de propionato de sòdio addeuviou a l'ea pægia à 5.000 mg de PFA/kg de peiso alimentare totale. Sta chì a l’é a conçentraçion ciù erta de PPA approvâ pe ëse deuviâ comme conservante alimentare. Pe preparâse pe sto studio, i ratti genitoî en stæti alimentæ tutte doe e diete pe 4 settemañe avanti de l’accobiamento e en anæti avanti pe tutta a gravidansa da diga. I ratti figgi [22 ratti, 9 contròlli (6 mascci, 3 femine) e 13 PPA (4 mascci, 9 femine)] en stæti deslevâ e dapeu son anæti avanti co-a mæxima dieta che e dighe pe 5 meixi. I ratti figgi en stæti sacrificæ à l’etæ de 5 meixi e o seu contegnuo de feçe intestinale o l’é stæto recuggeito e a-o comenso conservou inte di cannæ de microçentrifuga de 1,5 ml à -20°C e dapeu trasferii inte un congelatô à -80°C fin à quande o DNA de l’òspite o l’é stæto esaurio e i açidi nucleichi micròbichi en stæti estræti.
O DNA de l’òspite o l’é stæto remposso segondo un protocòllo modificou (Charalampous et al., 2019). In curta, i contegnui de feçe en stæti trasferii à 500 μl d’InhibitEX (Qiagen, Cat#/ID: 19593) e conservæ zeæ. Travaggiâ un mascimo de 1-2 pellet fecali pe estraçion. Dapeu i contegnui fecali en stæti omogeneizzæ mecanicamente con deuviâ un pesto de plastica drento do cannæ pe formâ unna pasta. Centrifugâ i campioin à 10.000 RCF pe 5 menuti ò fin à quande i campioin son stæti pellettæ, dapeu aspirâ o sorvenatante e sospende torna o pellet inte 250 μl 1× PBS. Azzonze 250 μl de soluçion de saponiña a-o 4,4% (TCI, numero de produto S0019) a-o campion comme detergente pe deslenguâ e membrañe de çellole eucariöte. I campioin son stæti mescciæ con delicatessa fin à ëse lisci e incubæ à temperatua ambiente pe 10 menuti. Pe avanti, pe interrompî e çellole eucariöte, l'é stæto azzonto 350 μl d'ægua sensa nucleaxi a-o campion, incubou pe 30 s e dapeu l'é stæto azzonto 12 μl de NaCl 5 M. I campioin son stæti donca centrifugæ à 6000 RCF pe 5 menuti. Aspira o sorvenatante e sospende torna o pellet inte 100 μl de PBS 1X. Pe remeuve o DNA de l’òspite, azzonze 100 μl de tampon HL-SAN (12,8568 g de NaCl, 4 ml de MgCl2 1M, 36 ml d’ægua sensa nucleaxi) e 10 μl de enzima HL-SAN (ArticZymes P/N 70910-202). I campioin son stæti mescciæ ben ben con pipettâ e incubæ à 37 °C pe 30 menuti à 800 giri/min in sce un ThermoMixer C EppendorfTM. Dòppo l'incubaçion, son stæti çentrifugæ à 6000 RCF pe 3 menuti e lavæ doe vòtte con 800 μ0 μ0 X1 l e P. Pe finî, sospende torna o pellet inte 100 μl de PBS 1X.
O DNA battëio totale o l’é stæto isolou pe mezo do kit de purificaçion do DNA genòmico do monarca da Neuva Inghiltæra (New England Biolabs, Ipswich, Massachusetts, Cat# T3010L). A proçedua de fonçionamento standard fornia co-o kit a l'é modificâ un pittin. Incubâ e mantegnî l’ægua sensa nucleaxi à 60°C primma de l’operaçion pe l’eluçion finale. Azzonze 10 μl de proteiñaxi K e 3 μl de RNasi A à ògni campion. Dapeu azzonze 100 μl de tampon pe-a lixi de çellole e mescciâ con delicatessa. Dapeu i campioin son stæti incubæ inte un termomescciatô EppendorfTM C à 56°C e 1400 giri/min pe-o manco unn'oa e fin à træ oe. I campioin incubæ son stæti centrifugæ à 12.000 RCF pe 3 menuti e o sorvenatante de ògni campion o l'é stæto stramuou inte un cannæ de microçentrifuga à parte de 1,5 mL ch'o contegniva 400 μL de soluçion de ligamme. Dapeu i cannæ en stæti vortexæ à impulsi pe 5-10 segondi à di intervalli de 1 segondo. Trasferî tutto o contegnuo de liquido de ògni campion (600-700 μL pöcassæ) inte unna cartuccia de filtro missa inte un cannæ de recuggeita à flusso. I cannæ en stæti çentrifugæ à 1.000 RCF pe 3 menuti pe permette o ligamme do DNA à l’incomenso e dapeu en stæti çentrifugæ à 12.000 RCF pe 1 menute pe remeuve o liquido ch’o l’arrestava. A chinòlla do campion a l'é stæta stramuâ inte un neuvo cannæ de recuggeita e dapeu lavâ doe vòtte. Pe-o primmo lavaggio, azzonze 500 μL de tampon de lavaggio à ògni cannæ. Inversâ o tubo 3-5 vòtte e dapeu centrifuga à 12.000 RCF pe 1 minuto. Descartâ o liquido da-o cannæ de recuggeita e mette torna a cartuccia do filtro into mæximo cannæ de recuggeita. Pe-o segondo lavaggio, azzonze 500 μL de tampon de lavaggio a-o filtro sensa invertî. I campioin son stæti centrifugæ à 12.000 RCF pe un menutetto. Trasferî o filtro inte un cannæ LoBind® de 1,5 mL e azzonze 100 μL d’ægua sensa nucleaxi prescadâ. I filtri en stæti incubæ à temperatua ambiente pe 1 minuto e dapeu çentrifugæ à 12.000 RCF pe 1 minuto. O DNA eluio o l’é stæto conservou à -80°C.
A conçentraçion de DNA a l’é stæta quantificâ pe mezo de un fluoròmetro QubitTM 4.0. O DNA o l’é stæto preparou pe mezo do Kit à erta sensibilitæ dsDNA QubitTM 1X (cat. n. Q33231) segondo e istruçioin do produttô. A distribuçion da longhixe di frammenti de DNA a l’é stæta mesuâ pe mezo de unna staçion à cassetta AglientTM 4150 ò 4200. O DNA o l’é stæto preparou pe mezo di reagenti genòmichi de DNA AgilentTM (n. A preparaçion da biblioteca a l’é stæta fæta pe mezo do kit de codificaçion à bare spedia PCR (SQK-RPB004) segondo e istruçioin do produttô. O DNA o l’é stæto sequensiou pe mezo de un sequensiatô Mk1 ONT GridIONTM con unna çellola de flusso Min106D (R 9.4.1). E impostaçioin de sequensiamento ean: ciamma de base d’erta preçixon, valô minimo q de 9, configuraçion do còdiçe à bare e trim do còdiçe à bare. I campioin son stæti sequensiæ pe 72 oe, dòppo i quæ i dæti de ciamma de base son stæti inviæ pe unn'atra elaboraçion e analixi.
L’elaboraçion da bioinformatica a l’é stæta fæta pe mezo de metodi descriti primma (Greenman et al., 2024). I file FASTQ ottegnui da-o sequensiamento son stæti scompartii inte di directory pe ògni campion. Avanti de l'analixi bioinformatica, i dæti son stæti elaboæ deuviando o pipeline chì apreuvo: pe primma cösa, i file FASTQ di campioin son stæti missi insemme inte un solo file FASTQ. Dapeu, e lettue ciù curte de 1000 bp en stæte filtræ pe mezo de Filtlong v. 0.2.1, co-o solo parametro cangiou ch’o l’ea –longhixe_min_1000 (Wick, 2024). Avanti de unn’atra filtraçion, a qualitæ da lettua a l’é stæta controllâ pe mezo de NanoPlot v. 1.41.3 co-i parametri che vëgnan apreuvo: –fastq –grafichi ponto –N50 -o
Pe-a clascificaçion tassonòmica, e lettue e i contigi assemblæ en stæti clascificæ pe mezo de Kraken2 v. 2.1.2 ( Wood et al., 2019 ). Generâ di rappòrti e di file de produçion pe-e lettue e i assemblæ rispettivamente. Utilizzâ l’opçion –use-names pe analizzâ e lettue e i assemblæ. E opçioin –gzip compresso e –accobbiou en speçificæ pe-i segmenti de lettue. L’abbondansa relativa di taxa inti metagenömi a l’é stæta stimâ pe mezo de Bracken v. 2,8 (Lu et al., 2017). Pe-a primma vòtta emmo creou unna base de dæti kmer ch’a contëgne 1000 base deuviando bracken-build co-i parametri seguenti: -d
L’annotaçion genica e a stimma de l’abbondansa relativa en stæte fæte pe mezo de unna verscion modificâ do protocòllo descrito da Maranga et al. (Maranga e atri, 2023). Pe primma cösa, i contighi ciù curti de 500 bp en stæti rempossi da tutti i assemblæ pe mezo de SeqKit v. 2.5.1 (Shen et al., 2016). Dapeu i assemblæ seleçionæ en stæti combinæ inte un pan-metagenöma. I quaddri de lettua averti (ORF) son stæti identificæ deuviando Prodigal v. 1.0.1 (unna verscion parallela de Prodigal v. 2.6.3) co-i parametri che vëgnan apreuvo: -d
I geni en stæti aggruppæ pe-a primma vòtta segondo i identificatoî ortòloghi (KO) de l’Enciclopedia di Geni e Genömi de Kyoto (KEGG) assegnæ da eggNOG pe confrontâ e abbondanse do percorso genico. I geni sensa knockout ò i geni con diversci knockout en stæti rempossi primma de l’analixi. Dapeu l'é stæto carcolou l'abbondansa media de ògni KO pe campion e l'é stæto fæto unn'analixi statistica. I geni do metabolismo de PPA en stæti definii comme un gene chesesegge ch’o l’agge avuo unna riga ko00640 inta colònna KEGG_Pathway, cösa ch’a l’indica un ròllo into metabolismo do propionato segondo KEGG. I geni identificæ comme assoçiæ a-a produçion de PPA en elencæ inta tabella 1 in azzonta. L'é stæto fæto di test de permutaçion pe identificâ o metabolismo e i geni de produçion de PPA ch'ean scignificativamente ciù abbondanti inte ògni tipo de campion. L’é stæto fæto mille permutaçioin pe ògni gene analizzou. Un valô de p de 0,05 o l'é stæto addeuviou comme limite pe determinâ o scignificato statistico. E annotaçioin fonçionale vegnivan assegnæ à di geni de pe loiatri drento de un gruppo basæ in scê annotaçioin di geni representativi drento do gruppo. I taxa assoçiæ a-o metabolismo de PPA e/ò a-a produçion de PPA porrieivan vegnî identificæ co-o corresponde di ID contig inti file de sciortia de Kraken2 co-i mæximi ID contig conservæ durante l’annotaçion fonçionale pe mezo de eggNOG. I test de scignificato son stæti fæti deuviando o test U de Mann-Whitney descrito in passou. A correçion pe ciù verifiche a l'é stæta fæta deuviando a proçedua Benjamini-Hochberg. Un valô de p de ≤ 0,05 o l'é stæto addeuviou comme limite pe determinâ o scignificato statistico.
A diverscitæ do microbiòma intestinale di ratti a l’é stæta valuâ pe mezo de l’indiçe de diverscitæ de Simpson. No s'é osservou de differense scignificative tra-i campioin de contròllo e quelli de PPA in termini de diverscitæ de genere e speçie (valô de p pe genere: 0,18, valô de p pe speçie: 0,16) (figua 1). Dapeu a compoxiçion micròbica a l’é stæta confrontâ pe mezo de l’analixi di componenti prinçipæ (PCA). A figua 2 a mostra l'aggruppamento di campioin pe-i seu phyla, ch'o l'indica che gh'é stæto de differense inta compoxiçion da speçie di microbiömi tra-i campioin PPA e quelli de contròllo. Sto gruppo o l’ea meno marcou à livello de genere, cösa ch’a suggerisce che o PPA o corpisce çerti battëi (fig. 1 in azzonta).
Figua 1. Diverscitæ alfa di generi e compoxiçion de speçie do microbiòma de l’intestin do ratto. I grafichi à scatoa che mostran i indiçi de diverscitæ do Simpson di generi (A) e de speçie (B) inti campioin de PPA e de contròllo. O scignificato o l'é stæto determinou pe mezo do test U do Mann-Whitney e l'é stæto fæto unna correçion multipla pe mezo da proçedua do Benjamini-Hochberg. ns, o valô de p o no l'ea scignificativo (p>0,05).
Figua 2. I resultati de l’analixi di componenti prinçipæ da compoxiçion do microbiòma de l’intestin do ratto à livello de speçie. O grafico d'analixi di componenti prinçipæ o mostra a distribuçion di campioin inti primmi doî componenti prinçipæ. I coî indican o tipo de campion: i ratti espòsti a-o PPA son cô de moæla e i ratti contròllo son gianni. I componenti prinçipæ 1 e 2 vëgnan representæ in sce l’asse x e in sce l’asse y rispettivamente e vëgnan espressi comme o seu rappòrto de variansa spiegou.
Pe mezo di dæti de conteggio trasformæ da RLE, s’é osservou unna diminuçion scignificativa do rappòrto median batteroide/baçilli inti ratti contròllo e PPA (controllo: 9,66, PPA: 3,02; valô de p = 0,0011). Sta differensa a l’é dovua à unn’abbondansa ciù erta de batteroide inti ratti PPA à peto di contròlli, sciben che a differensa a no l’ea scignificativa (CLR medio do contròllo: 5,51, CLR medio do PPA: 6,62; valô de p = 0,054), tanto che l’abbondansa de batteroide a l’ea pægia (CLR medio do contròllo7.6PA:0.7; valô de p = 0,18).
L’analixi de l’abbondansa de membri tassonòmichi do microbiöma de l’intestin a l’à revelou che 1 phylum e 77 speçie differivan scignificativamente tra i campioin de PPA e quelli de contròllo (tabella 2 in azzonta). L'abbondansa de 59 speçie inti campioin de PPA a l'ea scignificativamente ciù erta che quella inti campioin de contròllo, incangio l'abbondansa de solo 16 speçie inti campioin de contròllo a l'ea ciù erta che quella inti campioin de PPA (figua 3).
Figua 3. Abbondansa differensiale de taxa into microbiòma intestinale de ratti PPA e de contròllo. I grafichi di vorchen mostran de differense inte l'abbondansa de generi (A) ò speçie (B) tra-i campioin de PPA e de contròllo. I ponti grixi no indican nisciuña differensa scignificativa inte l’abbondansa di taxa. I ponti de cô indican de differense scignificative inte l’abbondansa (valô de p ≤ 0,05). I 20 taxa ciù erti co-e differense d'abbondansa ciù grende tra-i tipi de campioin son mostræ rispettivamente in rosso e in bleu ciæo (campioin de contròllo e PPA). I ponti gianni e cô de moæla ean a-o manco 2,7 vòtte ciù abbondanti inti campioin de contròllo ò de PPA che inti contròlli. I ponti neigri representan di taxa con de abbondanse scignificativamente despæge, con de differense medie de CLR tra -1 e 1. I valoî de P en stæti carcolæ pe mezo do test U de Mann-Whitney e corretti pe ciù test pe mezo da proçedua de Benjamini-Hochberg. E differense de CLR medie grasse indican de differense scignificative inte l'abbondansa.
Dòppo avei analizzou a compoxiçion micròbica de l’intestin, emmo fæto unn’annotaçion fonçionale do microbiòma. Dòppo avei filtrou di geni de bassa qualitæ, l’é stæto identificou un totale de 378.355 geni unichi inte tutti i campioin. L'abbondansa trasformâ de sti geni a l'é stæta addeuviâ pe l'analixi di componenti prinçipæ (PCA) e i exiti an mostrou un erto livello d'aggruppamento de qualitæ de campioin in sciâ base di seu profî fonçionali (figua 4).
Figua 4. I resultati da PCA pe mezo do profî fonçionale do microbiòma de l’intestin do ratto. O grafico PCA o mostra a distribuçion di campioin inte doe primme componente prinçipæ. I coî indican o tipo de campion: i ratti espòsti a-o PPA son cô de moæla e i ratti contròllo son gianni. I componenti prinçipæ 1 e 2 vëgnan representæ in sce l’asse x e in sce l’asse y rispettivamente e vëgnan espressi comme o seu rappòrto de variansa spiegou.
Dapeu emmo examinou l'abbondansa de knockout KEGG inte di tipi differenti de campioin. Inte l'insemme l'é stæto identificou 3648 knockout unichi, di quæ 196 ean scignificativamente ciù abbondanti inti campioin de contròllo e 106 ean ciù abbondanti inti campioin de PPA (figua 5). Inte l'insemme l'é stæto nottou 145 geni inti campioin de contròllo e 61 geni inti campioin de PPA, con de abbondanse scignificativamente despæge. I percorsci ligæ a-o metabolismo di lipidi e di aminosuccai ean scignificativamente ciù inricchii inti campioin de PPA (tabella 3 in azzonta). I percorsci ligæ a-o metabolismo de l'azöto e a-i scistemi de relay de sorfo ean ben ben ciù inricchii inti campioin de contròllo (tabella 3 in azzonta). L’abbondansa de geni ligæ a-o metabolismo d’aminosuccao/nucleotidi (ko:K21279) e do fosfato d’inoxitölo (ko:K07291) a l’ea scignificativamente ciù erta inti campioin de PPA (figua 5). I campioin de contròllo aivan ben ben ciù geni ligæ a-o metabolismo do benzoato (ko:K22270), a-o metabolismo de l'azöto (ko:K00368) e a-a glicoxi/gluconeogenexi (ko:K00131) (figua 5).
Fig. 5. Abbondansa differençiale de KO into microbiöma intestinale de ratti PPA e contròllo. O grafico do vorcan o mostra e differense inte l’abbondansa de gruppi fonçionali (KO). I ponti grixi indican di KO che a seu abbondansa a no l'ea scignificativamente despægia tra-i tipi de campioin (valô de p > 0,05). I ponti de cô indican de differense scignificative inte l’abbondansa (valô de p ≤ 0,05). I 20 KO co-e differense ciù grende d'abbondansa tra-i tipi de campioin son mostræ in rosso e bleu ciæo, che correspondan rispettivamente a-i campioin de contròllo e PPA. I ponti gianni e moælo indican di KO che ean a-o manco 2,7 vòtte ciù abbondanti inti campioin de contròllo e PPA rispettivamente. I ponti neigri indican di KO con de abbondanse scignificativamente despæge, con de differense medie de CLR tra -1 e 1. I valoî de P son stæti carcolæ deuviando o test U de Mann-Whitney e regolæ pe ciù confronti deuviando a proçedua Benjamini-Hochberg. NaN o l’indica che o KO o no l’appartëgne à un percorso inte KEGG. I valoî de differensa CLR medi in grasso indican de differense scignificative inte l'abbondansa. Pe de informaçioin into menuo in scî percorsci a-i quæ appartëgnan i KO elencæ, s’ammie a tabella 3 in azzonta.
Tra-i geni annotæ, 1601 geni aivan de abbondanse scignificativamente despæge tra-i tipi de campioin (p ≤ 0,05), con ògni gene ch’o l’ea a-o manco 2,7 vòtte ciù abbondante. De sti geni, 4 geni ean ciù abbondanti inti campioin de contròllo e 1597 geni ean ciù abbondanti inti campioin PPA. Dæto che o PPA o l'à de propietæ antimicròbiche, emmo examinou e abbondanse de geni de metabolismo e de produçion de PPA tra-i tipi de campioin. Tra-i 1332 geni ligæ a-o metabolismo de PPA, 27 geni ean scignificativamente ciù abbondanti inti campioin de contròllo e 12 geni ean ciù abbondanti inti campioin de PPA. Tra i 223 geni ligæ a-a produçion de PPA, 1 gene o l’ea scignificativamente ciù abbondante inti campioin de PPA. A figua 6A a mostra pe de ciù l'abbondansa ciù erta de geni ligæ a-o metabolismo de PPA, con unn'abbondansa scignificativamente ciù erta inti campioin de contròllo e de gren dimenscioin d'effetto, incangio a figua 6B a l'evidençia di geni de pe loiatri con unn'abbondansa scignificativamente ciù erta osservâ inti campioin de PPA.
Fig. 6. Abbondansa differensiale de geni ligæ a-o PPA into microbiòma de l’intestin do ratto. I grafichi di vorchen representan e differense inte l’abbondansa de geni ligæ a-o metabolismo de PPA (A) e a-a produçion de PPA (B). I ponti grixi indican di geni che a seu abbondansa a no l'ea scignificativamente despægia tra-i tipi de campioin (valô de p > 0,05). I ponti de cô indican de differense scignificative inte l’abbondansa (valô de p ≤ 0,05). I 20 geni co-e differense ciù grende d’abbondansa vëgnan mostræ in rosso e bleu ciæo (campioin de contròllo e PPA) rispettivamente. L'abbondansa de ponti giani e cô de moæla a l'ea a-o manco 2,7 vòtte ciù grande inti campioin de contròllo e de PPA che inti campioin de contròllo. I ponti neigri representan di geni con de abbondanse scignificativamente despæge, con de differense medie de CLR tra -1 e 1. I valoî de P en stæti carcolæ pe mezo do test U de Mann-Whitney e corretti pe diversci confronti pe mezo da proçedua de Benjamini-Hochberg. I geni correspondan à di geni representativi into catalogo di geni no redondanti. I nommi genichi conscistan into scimbolo KEGG ch’o denòtta un gene KO. E differense de CLR medie grasse indican de abbondanse scignificativamente despæge. Un trattino (-) o l’indica che no gh’é nisciun scimbolo pe-o gene inta banca de dæti KEGG.
I taxa con di geni ligæ a-o metabolismo e/ò a-a produçion de PPA en stæti identificæ co-a correspondensa de l’identitæ tassonòmica di contig con l’ID contig do gene. À livello de genere l’é stæto nottou che 130 generi an di geni ligæ a-o metabolismo de PPA e 61 generi an di geni ligæ a-a produçion de PPA (tabella 4 in azzonta). À tutti i mòddi, nisciun genere o l’à mostrou de differense scignificative inte l’abbondansa (p > 0,05).
À livello de speçie l’é stæto nottou che 144 speçie batteriche an di geni assoçiæ a-o metabolismo de PPA e 68 speçie batteriche an di geni assoçiæ a-a produçion de PPA (tabella 5 in azzonta). Tra-i metabolizzatoî de PPA, eutto battëi an mostrou di aumenti scignificativi d'abbondansa tra-i tipi de campioin e tutti an mostrou di cangi scignificativi inte l'effetto (tabella 6 in azzonta). Tutti i metabolizzatoî de PPA identificæ con de differense scignificative d'abbondansa ean ciù abbondanti inti campioin de PPA. A clascificaçion à livello de speçie a l’à revelou di representanti de generi che no differivan scignificativamente tra i tipi de campioin, compreiso diverse speçie de battëi e ruminocòcchi, coscì comme Duncania dubois, mixobattëio enterica, monocòcco pettinolitico e alcaligene polimorfi. Tra-i battëi che produxan PPA, quattro battëi an mostrou de differense scignificative d'abbondansa tra-i tipi de campioin. E speçie con de differense scignificative inte l’abbondansa comprendeivan o battëio neuvo, o duncanio doggio, o missobattëio enteritide e o ruminocòcco boviso.
Inte sto studio emmo examminou i effetti de l’espoxiçion a-o PPA in sciô microbiota intestinale di ratti. O PPA o peu provocâ de respòste diverse inti battëi perché o l’é produto da çerte speçie, o ven deuviou comme vivagne alimentare da de atre speçie ò o l’à di effetti antimicròbichi. De conseguensa, a seu azzonta à l’ambiente intestinale pe mezo de supplementaçioin dietetiche a peu avei di effetti despægi à segonda da tolleransa, da suscettilitæ e da capaçitæ de deuviâlo comme vivagne de nutrienti. E speçie battëie senscibile peuan vegnî eliminæ e sostituie da quelle ciù rescistente a-o PPA ò che peuan deuviâlo comme vivagne d’alimento, portando à di cangi inta compoxiçion do microbiota intestinale. I nòstri exiti an revelou de differense scignificative inta compoxiçion micròbica, ma nisciun effetto in sciâ diverscitæ micròbica complesciva. I effetti ciù grendi son stæti osservæ à livello de speçie, con ciù de 70 taxa scignificativamente despægi in abbondansa tra-i campioin de PPA e de contròllo (tabella 2 in azzonta). Unn'atra valutaçion da compoxiçion di campioin espòsti à PPA a l'à mostrou unn'eterogeneitæ ciù grande de speçie micròbiche à peto di campioin no espòsti, cösa ch'a fa accapî che o PPA o peu megioâ e caratteristiche de crescita battëia e limitâ e popolaçioin battëie che peuan vive inte di ambienti ricchi de PPA. Donca, o PPA o peu indue selettivamente di cangi ciufito che provocâ unna interruçion esteisa da diverscitæ do microbiota intestinale.
In passou l’é stæto demostrou che i conservanti alimentari comme o PPA alteran l’abbondansa de componenti do microbiòma intestinale sensa influensâ a diverscitæ complesciva (Nagpal et al., 2021). Chì emmo osservou e differense ciù marcante tra e speçie de batteroideti drento do phylum batteroideti (conosciui primma comme batteroideti), ch’ean scignificativamente inricchii inte di ratti espòsti à PPA. L’aumento de l’abbondansa de speçie de Bacteroides o l’é assoçiou à unn’aumento da degraddaçion do muco, ch’o peu accresce o reisego d’infeçion e promeuve l’inflamaçion (Cornick e atri, 2015; Desai e atri, 2016; Penzol e atri, 2019). Un studio o l’à nottou che i ratti mascci neonati trattæ con Bacteroides fragilis mostravan di comportamenti soçiali che s’arregordan do desturbo do spettro autista (ASD) (Carmel et al., 2023) e di atri studdi an demostrou che e speçie de Bacteroides peuan alterâ l’attivitæ immunitäia e portâ à unn’inflamaçion autoimmunitäia. 2019). E speçie ch’appartëgnan a-i generi ruminocòcchi, prevotella e parabattròidi en stæte aumentæ de forma scignificativa ascì inti ratti espòsti a-o PPA (Coretti et al., 2018). Çerte speçie de Ruminococcus en assoçiæ à de mouttie comme a mouttia de Crohn pe mezo da produçion de citociñe proinfiammatöie (Henke et al., 2019), mentre de speçie de Prevotella comme Prevotella umaña en assoçiæ à de mouttie metabòliche comme l’ipertenscion e a sensibilitæ à l’insuliña. 2017). Pe finî, emmo nottou che o rappòrto tra i batteròidi (conosciui primma comme Firmicuti) e i batteròidi o l’ea scignificativamente ciù basso inti ratti espòsti à PPA che inti ratti contròllo apreuvo à unn’abbondansa totale ciù erta de speçie de batteròidi. Sto rappòrto o l’é stæto demostrou in passou comme un indicatô importante de l’omeostaxi intestinale e i desturbi inte sto rappòrto en stæti assoçiæ à diversci stati de mouttia (Turpin e atri, 2016; Takezawa e atri, 2021; An e atri, 2023), compreiso e mouttie inflammatoie de l’intestin (Sto20). Insemme, e speçie do phylum Bacteroidetes pan ëse corpie ciù fortemente da-o PPA dietetico elevou. Sto fæto o peu ëse dovuo à unna tolleransa ciù erta a-o PPA ò a-a capaçitæ de deuviâ o PPA comme vivagne d’energia, cösa ch’a s’é demostrâ vea a-o manco pe unna speçie, Hoylesella enocea (Hitch et al., 2022). In alternativa, l’espoxiçion materna a-o PPA a peu megioâ o sviluppo do feto rendendo l’intestin di figgi de ratto ciù suscettile a-a colonizzaçion di Bacteroidetes; però, o nòstro progetto de studdio o no permetteiva unna valutaçion pægia.
A valutaçion do contegnuo metagenòmico a l’à revelou de differense scignificative inte l’abbondansa de geni assoçiæ a-o metabolismo e a-a produçion de PPA, co-i ratti espòsti à PPA che mostravan unn’abbondansa ciù erta de geni responsabili da produçion de PPA, mentre i ratti no espòsti à PPA mostravan unn’abbondansa ciù erta de geni responsabili de PA (fig.6). Sti resultati suggeriscian che l’effetto do PPA in sciâ compoxiçion micròbica o porrieiva no ëse dovuo solo che a-o seu deuvio, sensa quello l’abbondansa de geni assoçiæ a-o metabolismo do PPA a l’avieiva dovuo mostrâ unn’abbondansa ciù erta into microbiòma intestinale de ratti espòsti à PPA. Unna spiegaçion a l’é che o PPA o media l’abbondansa battëia sorviatutto pe mezo di seu effetti antimicròbichi ciufito che pe mezo da seu utilizzaçion da parte di battëi comme nutriente. Di studdi preçedenti an demostrou che o PPA o l’inibisce a crescita da Salmonella Tifimuria à unna mainea dependente da-a dòse (Jacobson et al., 2018). L’espoxiçion à de conçentraçioin ciù erte de PPA a peu seleçionâ pe di battëi che son rescistenti a-e seu propietæ antimicròbiche e peuan no ëse pe fòrsa boin à metabolizzâlo ò produlo. Comme exempio, diverse speçie de Parabacteròidi an mostrou unn’abbondansa scignificativamente ciù erta inti campioin de PPA, ma no l’é stæto nottou di geni ligæ a-o metabolismo ò a-a produçion de PPA (tabelle 2, 4 e 5 in azzonta). Pe de ciù, a produçion de PPA comme sottoproduto da fermentaçion a l’é largamente distribuia tra diversci battëi (Gonzalez-Garcia et al., 2017). A diverscitæ battëia ciù erta a peu ëse a raxon pe l’abbondansa ciù erta de geni ligæ a-o metabolismo de PPA inti campioin de contròllo (Averina et al., 2020). Pe de ciù, solo che 27 (2,14%) di 1332 geni en stæti previsti comme di geni assoçiæ solo che a-o metabolismo de PPA. Tanti geni assoçiæ a-o metabolismo da PPA en ligæ ascì à di atri percorsci metabòlichi. Questo o demostra pe de ciù che l'abbondansa de geni ligæ a-o metabolismo do PPA a l'ea ciù erta inti campioin de contròllo; sti geni peuan fonçionâ inte di percorsci che no se traduxan inte l’utilizzaçion ò inta formaçion de PPA comme sottoproduto. Inte sto caxo, solo che un gene assoçiou a-a generaçion de PPA o l'à mostrou de differense scignificative d'abbondansa tra-i tipi de campioin. À differensa di geni assoçiæ a-o metabolismo de PPA, i geni marcatoî pe-a produçion de PPA en stæti seleçionæ perché piggian parte direttamente a-o percorso battëio pe-a produçion de PPA. Inti ratti espòsti à PPA s’é nottou che tutte e speçie an unn’abbondansa e unna capaçitæ de produe PPA scignificativamente aumentæ. Sto fæto o sostëgne a previxon che i PPA seleçionieivan di produttoî de PPA e donca preveddan che a capaçitæ de produçion de PPA a l'aumentieiva. À tutti i mòddi, l’abbondansa genica a no l’é pe fòrsa in correlaçion con l’esprescion genica; donca, sciben che l'abbondansa de geni ligæ a-o metabolismo de PPA a l'é ciù erta inti campioin de contròllo, o tasso d'esprescion o peu ëse despægio (Shi et al., 2014). Pe confermâ a relaçion tra a prevalensa di geni che produxan PPA e a produçion de PPA, l’é neçessäio di studdi in sce l’esprescion di geni ligæ a-a produçion de PPA.
L’annotaçion fonçionale di metagenömi de PPA e de contròllo a l’à revelou çerte differense. L'analixi PCA do contegnuo genico a l'à mostrou di gruppi discreti tra PPA e campioin de contròllo (figua 5). L'aggruppamento de drento a-i campioin o l'à mostrou che o contegnuo do gene de contròllo o l'ea ciù diverso, incangio i campioin de PPA s'aggruppavan insemme. L’aggruppamento pe contegnuo genico o se poeiva paragonâ à l’aggruppamento pe compoxiçion da speçie. Donca, e differense inte l’abbondansa de percorsci en coerente co-i cangi inte l’abbondansa de speçie e çeppi speçifichi drento de liatre. Inti campioin de PPA, doî percorsci con unn’abbondansa scignificativamente ciù erta ean ligæ a-o metabolismo de succao aminosuccao/nucleotidico (ko:K21279) e à diversci percorsci de metabolismo di lipidi (ko:K00647, ko:K03801; tabella 3 in azzonta). I geni assoçiæ à ko:K21279 en conosciui comme assoçiæ a-o genere Bacteroides, un di generi con unna quantitæ scignificativamente ciù grande de speçie inti campioin PPA. St’enzima o peu schivâ a respòsta immunitäia con l’esprescion de polisaccaridi capsulari (Wang et al., 2008). Sto fæto o peu spiegâ l’aumento di Bacteroideti osservæ in sce di ratti espòsti à PPA. Sto fæto o completa l’aumento da scintexi di açidi grasci osservâ into microbiöma PPA. I battëi deuvian o percorso FASIIko:K00647 (fabB) pe produe di açidi grasci, che peuan influensâ i percorsci metabòlichi de l’òspite (Yao e Rock, 2015; Johnson et al., 2020) e i cangi into metabolismo di lipidi peuan zugâ un ròllo into neurosviluppo (Yu et al., 20). Un atro percorso ch'o mostrava unn'abbondansa ciù grande inti campioin de PPA o l'ea a bioscintexi de l'ormon steròideo (ko:K12343). Gh’é de preuve sempre ciù tante che gh’é unna relaçion inversa tra a capaçitæ do microbiota intestinale d’influensâ i livello d’ormoin e d’ëse influensou da-i ormoin, de mòddo che i livello de steròidi erti peuan avei de conseguense pe-a sanitæ à valle (Tetel et al., 2018).
Sto studdio o no l'é sensa limitaçioin e conscideraçioin. Unna distinçion importante a l’é che no emmo fæto de valutaçioin fixològiche de bestie. De conseguensa, no l’é poscibile concludde direttamente se i cangi into microbiòma son assoçiæ à quarche mouttia. Unn'atra conscideraçion a l'é che i ratti inte sto studio an reçevuo a mæxima dieta che e seu moæ. Di studdi d’avvegnî peuan determinâ se o passaggio da unna dieta ricca de PPA à unna dieta sensa PPA o megioa i seu effetti in sciô microbiòma. Unna limitaçion do nòstro studio, comme tante atre, a l'é a dimenscion limitâ do campion. Sciben che se peu tiâ de concluxoin valide, unna dimenscion do campion ciù grande a fornieiva unn'influensa statistica ciù grande quande s'analizza i exiti. Semmo ascì attenti à tiâ de concluxoin in sce unn’assoçiaçion tra i cangi into microbiòma de l’intestin e quæ se segge mouttia (Yap et al., 2021). I fattoî de confuxon, comme l’etæ, o genere e a dieta, peuan influensâ de forma scignificativa a compoxiçion di microrganismi. Sti fattoî peuan ascciæî e incoerense osservæ inta lettiatua in sce l’assoçiaçion do microbiòma de l’intestin con de mouttie complesse (Johnson et al., 2019; Lagod e Naser, 2023). Comme exempio, l’é stæto demostrou che i membri do genere Bacteroidetes son aumentæ ò diminuii inte bestie e inti òmmi con TSA (Angelis et al., 2013; Kushak et al., 2017). Do mæximo, i studdi in sciâ compoxiçion de l’intestin inte di paçienti con de mouttie d’inflamaçion de l’intestin an attrovou tanto di aumenti comme de diminuçioin inti mæximi taxa (Walters et al., 2014; Forbes et al., 2018; Upadhyay et al., 2023). Pe limitâ l'impatto do pregiudiçio de genere, emmo çercou d'asseguâ unna rappresentansa pægia di sessi de mainea che e differense fïsan guiddæ con tutta probabilitæ da-a dieta. Unna sfidda de l’annotaçion fonçionale a l’é a remoçion de sequense geniche redondante. O nòstro metodo d’aggruppamento genico o domanda unn’identitæ de sequensa do 95% e unna sumeggiansa de longhixe de l’85%, coscì comme unna covertua d’allineamento do 90% pe eliminâ o fäso clustering. À tutti i mòddi, inte çerti caxi emmo osservou di COG co-e mæxime annotaçioin (comme MUT) (fig. 6). Gh’é de beseugno d’atri studdi pe determinâ se sti ortòloghi en distinti, assoçiæ à di generi speçifichi ò se sta chì a l’é unna limitaçion da metodologia d’aggruppamento genico. Unn’atra limitaçion de l’annotaçion fonçionale a l’é a potençiale clascificaçion errâ; o gene battëio mmdA o l’é un enzima conosciuo ch’o piggia parte a-a scintexi do propionato, ma KEGG o no ô assoçia a-o percorso metabòlico do propionato. Pe contra, i ortòloghi scpB e mmcD en ligæ. A gran quantitæ de geni sensa di knockout designæ a peu portâ à unn’incapaçitæ d’identificâ di geni ligæ a-o PPA quande se valuta l’abbondansa genica. Di studdi d’avvegnî s’avvantaggian de l’analixi do metatranscrittòma, ch’a peu fornî unna comprenscion ciù profonda de caratteristiche fonçionale do microbiota intestinale e collegâ l’esprescion genica à di effetti downstream potensiali. Pe-i studdi che an da fâ con di desturbi speçifichi do neurosviluppo ò de mouttie d’inflamaçion de l’intestin, l’é neçessäio de valutaçioin fisiològiche e comportamentale di animæ pe collegâ i cangi inta compoxiçion do microbiòma à sti desturbi. Di atri studdi che trapiantan o microbiòma de l’intestin in sce di ratti sensa germi saieivan utili ascì pe determinâ se o microbiòma o l’é un fattô ò unna caratteristica da mouttia.
Pe finî, emmo demostrou che o PPA dietetico o fonçioña comme un fattô inte l’alteraçion da compoxiçion do microbiota intestinale. O PPA o l’é un conservante approvou da-a FDA ch’o s’attreuva pe coscì inte diversci alimenti che, à l’espoxiçion à longo raggio, o peu portâ à unna desturbaçion da normale flòra intestinale. Noemmo l’é stæto attrovou di cangi inte l’abbondansa de diversci battëi, cösa ch’a suggerisce che o PPA o peu influensâ a compoxiçion do microbiota de l’intestin. I cangi into microbiota peuan portâ à di cangi inti livello de çerti percorsci metabòlichi, che peuan portâ à di cangi fisiològichi relevanti pe-a sanitæ de l’òspite. Gh’é de beseugno d’atri studdi pe determinâ se i effetti da PPA dietetrica in sciâ compoxiçion micròbica peuan portâ à unna disbioxi ò à de atre mouttie. Sto studio o mette e base pe di studdi de l’avvegnî in sce comme i effetti do PPA in sciâ compoxiçion de l’intestin peuan influî in sciâ sanitæ umaña.
I insemmi de dæti presentæ inte sto studdio son à dispoxiçion inti archivi in linia. O nomme do archivio e o numero d'açescion son: PRJNA1092431.
Sto studio in scê bestie o l’é stæto approvou da-o Comitato instituçionale pe-a cura e l’utilizzaçion de bestie de l’Universcitæ da Florida çentrale (UCF-IACUC) (numero de permisso d’utilizzaçion de bestie: PROTO202000002). Sto studdio o l'é in conformitæ co-e leze, i regolamenti e i requixiti instituçionæ do pòsto.
NG: Conçettualizzaçion, Curaçion di dæti, Analixi formale, Reçerca, Metodologia, Software, Vixoalizzaçion, Scritua (bozzetto originâ), Scritua (revixon & ediçion). LA: Conçettualizzaçion, Curaçion di dæti, Metodologia, Resòrse, Scritua (revixon & ediçion). SH: Analixi formale, Software, Scritua (revixon & modifica). SA: Reçerca, Scrittua (revixon & ediçion). Giudiçe Cappo: Investigaçion, Scrittua (revixon & ediçion). SN: Conçettualizzaçion, Amministraçion do progetto, Resòrse, Supervixon, Scritua (revixon & modifica). TA: Conçettualizzaçion, Amministraçion do progetto, Supervixon, Scrittua (revixon & modifica).
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O materiale in azzonta pe sto articolo o se peu attrovâ in linia:
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Tempo de pubricaçion: 18 d'arvî do 2025